北京兰博康斯科技有限公司

8 年

手机商铺

商家活跃:
产品热度:

北京兰博康斯科技有限公司

入驻年限:8 年

  • 联系人:

    薛女士

  • 所在地区:

    北京 昌平区

  • 业务范围:

    试剂、耗材、实验室仪器 / 设备

  • 经营模式:

    经销商

在线沟通

公司新闻/正文

细胞冻存的 7 个注意事项

人阅读 发布时间:2020-04-24 16:48

一、细胞冻存

方法:

冻存液最好现配:按 1:3:6(或 1:2:7) 配冻存液 1 份 DMSO3 份血清和 6 份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基)。取生长状态量好的细胞进行冻存处理,对于贴壁细胞:
1、吸出旧培养液加 PBS 冲洗一次
2、胰酶消化
3、加培养基中止消化,有的细胞是加血清中止
4、离心收集细胞,不同细胞离心率不一样(以上仅为贴壁细胞,悬浮细胞收集就用第四部)
5、吸出离心管上清液,加 1mL 的冻存液重悬细胞,移到冻存管,放 4 度半小时,-20 度两小时,-70 度过夜,再放液氮长期保存

悬浮细胞:直接离心收集,PBS 洗涤

注意事项:

1、错误的时机:细胞状态不好(长的太过了,培养液已经很黄;细胞可疑污染;细胞已 经开始凋亡或崩解;连续培养超过二个月,细胞性状已有改变改变)。
解决:最佳时机:细胞增殖旺盛,情况稳定,试验效果良好,复苏后两周内。

2、细胞太少:冻存时细胞浓度低于 1-5×1000,000/ml。(复苏很难成功)。
解决:离心后调整细胞浓度(不要重新洗细胞)。

3、盖子不紧:冻存管的盖子一定要拧紧,否则复苏水浴时会渗水,造成污染。
解决:选择原配的管子和盖子(不同牌子 / 型号的颜色会有差别)。

4、单薄的冻存盒:放在 -80 度的冻存盒,壁太薄,细胞在被迅速降温。
解决:选择厚壁泡沫塑料盒,或塞入大量干棉花。(冻存的原则:缓降!)

5、-80 度太久:放在 -80 度冰箱的时间超过半年(冰箱的温度难以恒定:开门 / 关门,电压不稳等)。
解决:尽快转入液氮。

6、液氮不足:液面不能漫过所有细胞。
解决:定期测量液氮储备,保证细胞全部浸在液面下。

7、取错细胞:找不到 / 拿错冻存管。
解决:每支冻存管都标上细胞的名称,冻存时间,并记录在册。


二、细胞复苏:

方法:

1、从液氮容器中取出冻存管,直接浸入 37 ℃ 温水中,并不时摇动令其尽快融化。
2、从 37 ℃ 水浴中取出冻存管,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液,加到离心管并滴加 10 倍以上培养液,混匀;
3、离心, 1000 rpm,5 min;
4、弃去上清液,加入含 10% 小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养瓶,37 ℃ 培养箱静置培养;
5、次日更换一次培养液,继续培养。

注意事项:

1、取错细胞:拿错冻存管(快快快,匆忙之中,难免出错,况且 -170 多度,冻手!)
解决:
(1)核查记录册及冻存管上细胞的名称、时间是否一致。
(2)拿细胞时戴手套!

2、水浴时间太长:2min 还没融化(冻存管的壁较厚,隔热)。
解决:
(1)适当提高水浴温度(37 度-40 度)。
(2)要是冬天,就选用保温盒。

3、冰盒内时间太长:复苏 1h 后,还没有加入新的培养液。(高浓度 DMSO 防止胞内形成冰晶,冻存时保护细胞,但复苏融解后,浸泡时间太久会,对细胞有毒性)
解决: 提前预定超净台,减少复苏后插在冰盒里等待的时间。

4、失去耐心:复苏三四天后,细胞没有任何动静,认为失败,倒掉所有细胞(有些细胞复苏后一星期,才有起色)。
解决:不要换液,耐心等待,两周后再做决定,英格恩。

上一篇

首批人类 COVID-19 免疫学研究揭示了普遍性的有效抗体

下一篇

axygen进口 pcr8联排管——荧光定量平盖 特价促销

更多资讯

询价列表

暂时没有已询价产品

快捷询价 发送名片
    当你希望让更多商家联系你时,可以勾选后发送询价,平台会将你的询价消息推荐给更多商家。
    yanxuan

    丁香通研选

    yanxuan

    丁香通小程序

    询价知情同意
    您知悉并同意,丁香通平台展示产品并非为平台自身产品,您发起询价或试用申请后,平台将会把您已提供或按要求提供的相关信息同步提供至所咨询的具体产品商家,由商家为您提供具体产品的价格咨询或产品试用注意事项及相关试用产品或完成相应购买,因此您知悉并授权平台将您的信息进行同步共享。您有权拒绝,但您知悉将无法参加询价或试用活动。